二至百合浓缩膏对去势雌性大鼠焦虑行为学的影响(1)
[摘要] 目的 探讨二至百合浓缩膏对去势雌性大鼠(双侧卵巢切除术)焦虑行为学的影响。 方法 3～4月龄Wistar雌性大鼠随机分成5组，假手术对照组，模型组，二至百合高、中、低剂量组。除假手术组，其余用手术摘除双侧卵巢建立去势更年期大鼠模型，给药组分别给予二至百合浓缩膏水溶液(1.92、0.96、0.48 g/kg)，假手术空白对照组和模型对照组给予相应容量的蒸馏水，连续45 d。采用高架十字迷宫和明暗箱实验，观察实验大鼠行为学的变化。 结果 二至百合高剂量组可显著减低模型大鼠高架十字迷宫实验中OT%，与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。二至百合高、中剂量组亦可显著升高大鼠明箱停留时间和穿箱次数，与模型组比较差异有统计学意义(均P<0.05)。 结论 二至百合浓缩膏具有较好的改善去势雌性模型大鼠焦虑症状的作用。
[关键词] 二至百合浓缩膏；抗焦虑；雌性大鼠；去势；高架十字迷宫；明暗箱
[中图分类号] R363 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616(2013)12-20-03
更年期综合征是妇女在这一时期由于雌激素水平下降所致的以机体内分泌失调、植物神经系统功能紊乱为主，伴有神经心理症状的一组症候群。二至百合组方中包含女贞子、旱莲草、百合、知母、牡蛎等中药组成成分，具有滋阴潜阳，退热安神之功效。主要用于妇女更年期初期，证见阴虚阳亢，阴虚发热，骨蒸潮热，焦虑烦躁，失眠多梦者。本实验通过雌性大鼠双侧卵巢祛除术复制大鼠更年期综合征模型，观察二至百合方对模型大鼠焦虑行为学指标的影响，初步评价药物的改善更年期焦虑作用。
1 资料与方法
1.1 药品及试剂
二至百合浓缩膏，北京中研同仁堂医药研发有限公司(批号20120902)。
1.2 实验动物
Wistar大鼠，75只，雌性，体重(200±20)g，SPF级，购自中国人民解放军军事科学院实验动物中心。许可证编号：SCXK-(军)2007-004。
1.3 仪器
海尔BCD-257SL冷藏冷冻冰箱：青岛海尔股份有限公司；Sartorious BT 124S电子精密天平：赛多利斯科学仪器(北京)有限公司；明暗穿梭箱、高架十字迷宫、高架十字迷宫实验视频分析系统、SLY-ETS小动物行为活动记录分析系统，均由北京硕林苑科技有限公司生产。
1.4 方法
1.4.1 动物模型制备与分组 在适应性饲养5 d后，将75只大鼠随机分为5组，分别为：假手术空白组，模型组，二至百合高剂量(1.92 g浓缩膏/kg)、中剂量(0.96 g浓缩膏/kg)、低剂量(0.48 g浓缩膏/kg)组，每组15只。
模型组及受试样品3个剂量组制备雌性去势大鼠(双侧卵巢切除术)模型[1-2]：大鼠0.1%戊巴比妥钠0.5 mL/100 g体重(50 mg/kg)腹腔注射麻醉。麻醉大鼠取俯卧位，在背部中1/3处剪毛、备皮，碘伏常规消毒。自腰椎沿背部正中线向下做纵行切口约2～3 cm，切开皮肤，沿肩胛线分别于左右两肋下剪开腰肌，暴露出卵巢及紧密相连的子宫，在子宫角上做两个结扎，结扎后切断，将卵巢摘除，缝合皮肤。术后连续腹腔注射72万U/kg青霉素，以防感染，1次/d，连续3 d。术后第3天开始给大鼠阴道涂片观察，连续5 d，每天1次，以确定卵巢完全切除。实验动物从术后的第5天起全部进入动情间期，但动物不再出现动情前期，动情期的雌激素变化，动物基本上符合“更年期”表现。假手术空白组大鼠除不行卵巢摘除外，其余步骤同模型组。
造模后9 d，除假手术空白组和模型组给予等体积蒸馏水外，其余各组开始灌胃给药，每日1次，连续45 d后分别进行高架十字迷宫和明暗箱行为学实验测试(先开展高架十字迷宫实验，其后间隔1周后开展明暗箱实验)。
1.4.2 大鼠高架十字迷宫实验 末次给药30 min后，进行高架十字迷宫行为学的测评。实验开始时，将大鼠放入高架十字迷宫中央，头朝开臂，观察5 min内大鼠的活动情况[3-5]。观察并记录以下各项指标：进入开臂次数，进入闭臂次数，以及在两臂的滞留时间。分别计算大鼠进入开臂的时间占总时间(开臂和闭臂滞留的时间之和)的百分比(open arm time percent，OT%)，以及大鼠进入开臂的次数占总次数(开臂与闭臂之和)的百分比(open arm entry percent，OE%)。观察时以大鼠四爪均进入开臂或闭臂为准。
1.4.3 大鼠明暗箱实验 末次给药30 min后，将大鼠置于明箱中央，背朝通道，观察5 min内大鼠的活动情况并记录明暗箱停留时间和穿箱次数。
以上两种行为学检测实验操作时，应保持外界环境安静，每次放入大鼠前清理干净箱内的排泄物，尽可能保证每批次检测的客观性。
1.5 统计学处理
采用SPSS13.0统计软件进行统计处理，数据以()表示，数据先进行方差齐性检验。方差齐选用One-Way ANOVA法进行各组间比较；方差不齐选用t检验进行组间比较。
2 结果
2.1 二至百合浓缩膏对去势大鼠高架十字迷宫行为活动的影响
实验结果显示，模型组组大鼠与假手术空白组比较，OE%和OT%显著减小(均P<0.01)，表现出明显的焦虑症状。二至百合高剂量组可显著减低模型大鼠OT%，与模型组组比较差异有统计学意义(P<0.05)。表明受试品具有较好的改善去势雌性模型大鼠高架十字迷宫焦虑症状的作用。见表1。
2.2 二至百合浓缩膏对去势大鼠明暗箱穿梭行为的影响
研究结果显示，模型组大鼠明箱停留时间和穿箱次数均显著降低，与假手术空白组比较差异有统计学意义(分别P<0.001， P<0.05)，表明模型组大鼠去势后，产生了明显的焦虑行为改变。与模型组比较，二至百合高剂量组可显著升高大鼠明箱停留时间和穿箱次数(分别P<0.001，P<0.01)，中剂量组可显著升高大鼠明箱停留时间和穿箱次数(均P<0.05)。见表2。, http://www.100md.com(靳冉等)
[关键词] 二至百合浓缩膏；抗焦虑；雌性大鼠；去势；高架十字迷宫；明暗箱
[中图分类号] R363 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616(2013)12-20-03
更年期综合征是妇女在这一时期由于雌激素水平下降所致的以机体内分泌失调、植物神经系统功能紊乱为主，伴有神经心理症状的一组症候群。二至百合组方中包含女贞子、旱莲草、百合、知母、牡蛎等中药组成成分，具有滋阴潜阳，退热安神之功效。主要用于妇女更年期初期，证见阴虚阳亢，阴虚发热，骨蒸潮热，焦虑烦躁，失眠多梦者。本实验通过雌性大鼠双侧卵巢祛除术复制大鼠更年期综合征模型，观察二至百合方对模型大鼠焦虑行为学指标的影响，初步评价药物的改善更年期焦虑作用。
1 资料与方法
1.1 药品及试剂
二至百合浓缩膏，北京中研同仁堂医药研发有限公司(批号20120902)。
1.2 实验动物
Wistar大鼠，75只，雌性，体重(200±20)g，SPF级，购自中国人民解放军军事科学院实验动物中心。许可证编号：SCXK-(军)2007-004。
1.3 仪器
海尔BCD-257SL冷藏冷冻冰箱：青岛海尔股份有限公司；Sartorious BT 124S电子精密天平：赛多利斯科学仪器(北京)有限公司；明暗穿梭箱、高架十字迷宫、高架十字迷宫实验视频分析系统、SLY-ETS小动物行为活动记录分析系统，均由北京硕林苑科技有限公司生产。
1.4 方法
1.4.1 动物模型制备与分组 在适应性饲养5 d后，将75只大鼠随机分为5组，分别为：假手术空白组，模型组，二至百合高剂量(1.92 g浓缩膏/kg)、中剂量(0.96 g浓缩膏/kg)、低剂量(0.48 g浓缩膏/kg)组，每组15只。
模型组及受试样品3个剂量组制备雌性去势大鼠(双侧卵巢切除术)模型[1-2]：大鼠0.1%戊巴比妥钠0.5 mL/100 g体重(50 mg/kg)腹腔注射麻醉。麻醉大鼠取俯卧位，在背部中1/3处剪毛、备皮，碘伏常规消毒。自腰椎沿背部正中线向下做纵行切口约2～3 cm，切开皮肤，沿肩胛线分别于左右两肋下剪开腰肌，暴露出卵巢及紧密相连的子宫，在子宫角上做两个结扎，结扎后切断，将卵巢摘除，缝合皮肤。术后连续腹腔注射72万U/kg青霉素，以防感染，1次/d，连续3 d。术后第3天开始给大鼠阴道涂片观察，连续5 d，每天1次，以确定卵巢完全切除。实验动物从术后的第5天起全部进入动情间期，但动物不再出现动情前期，动情期的雌激素变化，动物基本上符合“更年期”表现。假手术空白组大鼠除不行卵巢摘除外，其余步骤同模型组。
造模后9 d，除假手术空白组和模型组给予等体积蒸馏水外，其余各组开始灌胃给药，每日1次，连续45 d后分别进行高架十字迷宫和明暗箱行为学实验测试(先开展高架十字迷宫实验，其后间隔1周后开展明暗箱实验)。
1.4.2 大鼠高架十字迷宫实验 末次给药30 min后，进行高架十字迷宫行为学的测评。实验开始时，将大鼠放入高架十字迷宫中央，头朝开臂，观察5 min内大鼠的活动情况[3-5]。观察并记录以下各项指标：进入开臂次数，进入闭臂次数，以及在两臂的滞留时间。分别计算大鼠进入开臂的时间占总时间(开臂和闭臂滞留的时间之和)的百分比(open arm time percent，OT%)，以及大鼠进入开臂的次数占总次数(开臂与闭臂之和)的百分比(open arm entry percent，OE%)。观察时以大鼠四爪均进入开臂或闭臂为准。
1.4.3 大鼠明暗箱实验 末次给药30 min后，将大鼠置于明箱中央，背朝通道，观察5 min内大鼠的活动情况并记录明暗箱停留时间和穿箱次数。
以上两种行为学检测实验操作时，应保持外界环境安静，每次放入大鼠前清理干净箱内的排泄物，尽可能保证每批次检测的客观性。
1.5 统计学处理
采用SPSS13.0统计软件进行统计处理，数据以()表示，数据先进行方差齐性检验。方差齐选用One-Way ANOVA法进行各组间比较；方差不齐选用t检验进行组间比较。
2 结果
2.1 二至百合浓缩膏对去势大鼠高架十字迷宫行为活动的影响
实验结果显示，模型组组大鼠与假手术空白组比较，OE%和OT%显著减小(均P<0.01)，表现出明显的焦虑症状。二至百合高剂量组可显著减低模型大鼠OT%，与模型组组比较差异有统计学意义(P<0.05)。表明受试品具有较好的改善去势雌性模型大鼠高架十字迷宫焦虑症状的作用。见表1。
2.2 二至百合浓缩膏对去势大鼠明暗箱穿梭行为的影响
研究结果显示，模型组大鼠明箱停留时间和穿箱次数均显著降低，与假手术空白组比较差异有统计学意义(分别P<0.001， P<0.05)，表明模型组大鼠去势后，产生了明显的焦虑行为改变。与模型组比较，二至百合高剂量组可显著升高大鼠明箱停留时间和穿箱次数(分别P<0.001，P<0.01)，中剂量组可显著升高大鼠明箱停留时间和穿箱次数(均P<0.05)。见表2。, http://www.100md.com(靳冉等)