[摘要]目的 探讨环状定点诱变技术在目标质粒单碱基突变，酶切位点修改和片段删除中的应用。方法 设计包含目标突变，部分互补且5’端含有5～8 bp突出的引物对，环状质粒作为模板进行扩增，甲基化酶DpnI酶消化去除模板质粒。转化DH5α感受态进行缺口修复，获得定点突变的目标质粒。结果 通过酶切和基因测序证明，环状定点诱变技术可高效用于单碱基突变、酶切位点修改和片段删除等突变。结论 环状定点诱变技术能够简便、高效、快捷地实现目标质粒的单碱基突变、酶切位点修改和片段删除，基本满足药物开发过程中载体构建的需求。

    [关键词]环状定点诱变;片段删除;酶切位点;PCR扩增

    [中图分类号] R450 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2020)9(b)-0032-04

    Application of circular site-directed mutagenesis in vector construction

    WANG Bin1 XING Ti-kun2 SONG Lu-ping2 YANG Zhen-ping2 JING Xin-rui2 WANG Ya-ping2 HUANG Shuai2 ZHANG Jing-jing2

    1. Department of Quality Control ......