丹参CYP76AH1转基因毛状根的建立及其蛋白的分离(2)
2方法21CYP76AH1Flag双元载体的构建根据CYP76AH1基因和载体pCAMBIA1300cFlag序列设计引物，1300cFlagAH1F：cggggtcgacatttaaataATGGATTCTTTTCCTCTC，1300cFlagAH1R： gtccatggtaccggatccactagAGACTTAACTATTGGGAT，以实验室保存的pESCHisCYP76AH1质粒为模板进行扩增，用pEASYUni Seamless Cloning and Assembly Kit进行连接，构建重组载体，具体实验步骤根据试剂盒说明书操作进行。将连接产物转化到Trans1T1感受态细胞上，在含有卡纳霉素的LB培养板(终浓度为50 mg·L-1)上，37 ℃培养过夜。挑取单克隆进行菌落PCR检测，经测序验证，命名为CYP76AH1cFlag。
22农杆菌转化重组质粒CYP76AH1cFlag转化发根农杆菌C58C1感受态细胞。取100 μL冻融的感受态细胞，加入cFlagCYP76AH1重组质粒1 μg ......
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