丹芪偏瘫胶囊中羚羊角用人工牛黄替代的体外研究(2)
2.3脑微血管内皮细胞的分离培养
参照本实验室前期建立的方法进行培养，取1月龄大鼠断颈处死，在75%乙醇中浸泡消毒5min，无菌操作打开颅腔后取出全脑，去除小脑、间脑等保留大脑皮质，仔细剥除软脑膜及大血管，将剩余皮质剪碎，用Ⅱ胶原酶37℃振荡消化1h，离心弃上清后，加20%BSA充分混匀，离心后去除上部神经组织，再用胶原酶/分散酶37℃振荡消化1h，培养液稀释后离心，用完全培养基重悬，接种到2%明胶包被的培养瓶培养。隔天换液1次，直至细胞长到70%～80%融合后即可传代。实验用生长状态良好的第2代细胞。
2.4DPC和DPCBD含药血清对缺氧损伤大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用
2.4.1复制体外缺氧损伤模型以体外缺氧损伤模拟缺血再灌注性脑损伤。大鼠脑微血管内皮细胞按5×104个/mL接种于96孔板中，每孔100μL，贴壁24h后，进行无血清同步化24h，利用三气培养箱进行缺氧实验，持续通入95%N2+5%CO2，待O2含量为1%并平衡后，计时缺氧3h ......
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参照本实验室前期建立的方法进行培养，取1月龄大鼠断颈处死，在75%乙醇中浸泡消毒5min，无菌操作打开颅腔后取出全脑，去除小脑、间脑等保留大脑皮质，仔细剥除软脑膜及大血管，将剩余皮质剪碎，用Ⅱ胶原酶37℃振荡消化1h，离心弃上清后，加20%BSA充分混匀，离心后去除上部神经组织，再用胶原酶/分散酶37℃振荡消化1h，培养液稀释后离心，用完全培养基重悬，接种到2%明胶包被的培养瓶培养。隔天换液1次，直至细胞长到70%～80%融合后即可传代。实验用生长状态良好的第2代细胞。
2.4DPC和DPCBD含药血清对缺氧损伤大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用
2.4.1复制体外缺氧损伤模型以体外缺氧损伤模拟缺血再灌注性脑损伤。大鼠脑微血管内皮细胞按5×104个/mL接种于96孔板中，每孔100μL，贴壁24h后，进行无血清同步化24h，利用三气培养箱进行缺氧实验，持续通入95%N2+5%CO2，待O2含量为1%并平衡后，计时缺氧3h ......
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