基于EGC研究大建中汤对肠易激综合征内脏痛模型大鼠的改善作用(3)
2.4 样品采集AWR评估完成后,腹腔注射戊巴比妥钠(0.4%,10 mL/kg)进行麻醉,切开大鼠腹腔,在距离其肛门7 cm处取结肠3 cm,分为3段,于-80 ℃保存。
2.5 结肠病理学观察
取各组大鼠结肠组织,固定,脱水,包埋,切片脱蜡至水,苏木精染色10~20 min;水冲洗1~3 min,用盐酸乙醇混合液(30%盐酸1 mL+75%乙醇99 mL)分化5~10 s;水冲洗1~3 min,置于50 ℃水中返蓝,直到出现蓝色为止;水冲洗1~3 min,置于85%乙醇中静置3~5 min,以伊红染色3~5 min;水冲洗3~5 s,经乙醇梯度脱水、二甲苯透明后,以中性树胶封片后进行图像采集,每张切片先于40倍下观察大体病变,再于100倍下观察具体病变。
2.6 結肠组织中GFAP、NGF、TrkA蛋白表达检测
采用Western blotting法检测各组大鼠结肠组织中GFAP、NGF、TrkA蛋白表达水平。将各组大鼠结肠组织裂解后剪成碎片,匀浆,于4 ℃下以12 000 r/min离心10 min ......
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